Biogradetech：HEK293外泌體促進分泌，全懸浮生長培養基

HEK293細胞是一種人類胚胎腎細胞系，常用于生物醫學研究和生產重組蛋白的工具。外泌體是一種小型的細胞分泌囊泡，它們在生物學中具有重要的功能和意義。

外泌體可以通過釋放內部的生物活性分子，如蛋白質、核酸、脂質和細胞因子等，與周圍細胞進行信息傳遞和相互作用。它們在細胞間通訊、信號傳導、免疫調節、疾病發展等方面發揮著重要的作用。

對于HEK293細胞而言，其外泌體具有多種生物學意義。首先，HEK293細胞可以產生大量的外泌體，使其成為研究外泌體生物學和功能的理想模型。研究人員可以通過分離和純化HEK293細胞產生的外泌體，進一步探索其組成、功能和調控機制。

其次，HEK293細胞可以被轉染或轉基因改造，使其產生特定的外泌體，用于傳遞特定的生物活性分子。這為研究特定信號通路、疾病機制以及開發外泌體作為治療載體或診斷工具提供了可能性。

此外，HEK293細胞外泌體的研究還可以揭示細胞間通訊的機制，探索外泌體在疾病發展中的作用，例如腫瘤轉移、炎癥反應和神經退行性疾病等。通過深入了解HEK293細胞外泌體的生物學意義，我們可以更好地理解細胞間相互作用的復雜性，并為疾病診斷和治療的研究提供新的思路和方法。

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HEK293 ExoBoost SF Medium是一款專用于促進HEK293來源外泌體分泌的全懸浮生長培養基，本培養基不含無動物源組分、無水解物、化學成分限定，可高效促進HEK293來源外泌體的分泌。

培養基使用方法

HEK293懸浮細胞培養

1. 細胞培養需要在CO₂環境下震蕩培養，可選擇CO₂培養箱搭配小搖床或自帶CO₂控制系統的搖床。培養條件：溫度曲線：37℃±0.5℃、濕度曲線：70%±20%、5% CO₂濃度、120-140rpm。

2. 培養過程中需注意以下三點：

1）保證搖床正常運轉；

2）防止外界環境溫度過高，導致培養箱內溫度失控；

3）防止培養箱內水盤缺水，導致培養箱內濕度過低。

培養基適應

1. 直接適應：最初培養階段，細胞按初始密度 0.7×10⁶ cells/mL 接種，直接將培養基更換為A-EXO004進行細胞培養。待細胞培養2-3代，且細胞生長穩定后進行后續實驗。

2. 間接適應：保持初始接種密度為0.7×10⁶ cells/mL。細胞培養過程中逐步減少原培養基直至完全在A-EXO004培養基中培養。原培養基與A-EXO004比例推薦為（75:25、50:50、25:75、10:90、最終為100% A-EXO004培養基），每個階段至少適應3代，細胞生長穩定后進行后續實驗。

3. 注意事項

1) 根據細胞具體情況選擇培養基直接適應或者間接適應。

2) 細胞馴化初期，若出現密度低、結團等不穩定狀態，根據密度選擇合適的傳代方式。

a. 稀釋傳代：根據細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，去除多余細胞懸液并補加新鮮培養基。

b. 離心傳代：根據細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，800rpm（114g）離心5min，去除上清，用新鮮培養基重懸細胞。

4. 細胞正常狀態傳代：

不同計數方式可能存在差異，建議使用Countstar細胞計數儀。

推薦外泌體生產工藝

1. 種子細胞準備。取生長穩定的懸浮細胞，測量細胞密度和活率（活率應大于90%）；

2. 接種細胞。按0.5-0.8×10⁶cells/mL密度接種到新的細胞搖瓶，將搖瓶放入搖床中培養；

3. 細胞生長狀態監測。細胞接種培養72h后，每12-24h測量一次細胞密度和活率；

如果期望得到更多的外泌體，在細胞培養72h后，可補充一些細胞營養物質。1） 添加1mL HEK293 Enhance Feed Medium（貨號A-EXO001）補料培養基（5%的總體積）；或者2）添加終濃度為3g/L葡萄糖、6-8mM 谷氨酰胺。

4. 收獲外泌體。當細胞活率低于85%時，停止培養，收獲培養上清，純化后得到外泌體。

培養基從4℃冰箱取出必須恢復到室溫后使用。

每次搖瓶取出進行轉染或計數等操作后，應盡快放回搖床，切勿長時間室溫放置。

HEK293懸浮細胞凍存

1. 待細胞恢復至正常狀態后，擴大細胞培養體積準備凍存建庫。盡量多建細胞庫，保證備份充足。

2. 選擇處于對數生長期、活率＞90%的細胞凍存，凍存密度:10-15×10⁶ cells/mL，推薦15×10⁶ cells/mL。

3. 準備凍存盒：向程序降溫盒注入適量異丙醇，置于4℃冰箱預冷。

4. 配制凍存液：凍存液 = 細胞培養基 + 10% FBS(建議使用進口胎牛血清) + 10% DMSO，凍存液配好后置于4℃冰箱預冷（凍存液配制時，先加培養基再加血清或DMSO，防止DMSO濃度過高導致血清有效成分變性）。

若選擇無血清凍存方案，推薦的凍存液配方：92.5% 培養基 + 7.5% DMSO。

5. 取細胞懸液，800rpm（114g）離心5min，棄上清，用細胞凍存液重懸細胞，調整細胞密度至目標值。

6. 快速分裝細胞液至凍存管中。

7. 將凍存管放入程序降溫盒中，放于-80℃冰箱，24h后轉至液氮罐中儲存。一段時間后復蘇檢測。

HEK293懸浮細胞復蘇

1. 預熱培養基：取20mL對應培養基置于搖瓶中，放入37℃二氧化碳培養箱中預熱30min以上（平衡培養基pH值），保證預熱充分。

2. 將凍存管從液氮保存罐或-80℃冰箱中取出，迅速轉移至37℃水浴中，快速搖晃，直至完全融化。

3. 取預熱的培養基5mL于無菌離心管中，并將解凍后的細胞懸液移入此離心管中。800rpm（114g）離心5min（除去凍存液中DMSO）。

4. 棄上清，用15mL預熱的培養基重懸細胞，移回相應搖瓶，放于培養箱中懸浮培養。

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Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。其產品均在嚴格的全球標準下生產，Biogradetech還提供專業的技術支持，幫助客戶選擇正確的產品，并正確使用產品。Biogradetech致力于為客戶提供高質量的產品和服務，是那些尋求高質量試劑和可靠結果的人值得信賴的合作伙伴。   

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