液體活檢NIPT解決方案

液體活檢：癌癥早篩 & 無創產前檢測（NIPT）解決方案：用于癌癥早篩和無創產前檢測（NIPT）的完整工作流程解決方案

簡介

一、完整的血漿/血清無細胞工作流程

    1、cf-DNA /cf-RNA收集與保存管

        a. 從血漿/血清中純化cf-RNA

        b. 從血漿/血清中純化cf-DNA

    2、cf-DNA /c f-RNA研究的實驗室指南

    3、血漿Small RNA測序，推薦工作流程

    4、無創產前檢測NIPT，開放平臺工作流程

    5、權威客戶案例

二、完整的尿液無細胞工作流程

    1、尿液收集和保存設備（管，杯，桶)

        a. 從尿液中提取cf-RNA

        b. 從尿液中提取cf-DNA

    2、推薦的小RNA測序工作流程

三、文章與出版物

一、簡介：

Norgen Biotek 提供完整的液體活檢工作流程，包括樣本采集和保存設備、cf-DNA/cf-RNA/exosomes純化、小RNA/RNA序列和高級生物信息學分析。

我們的樣本保存技術，特別針對血漿、尿液和唾液，在保存時間、樣本完整性、運輸和存儲以及多分析物保存方面具有許多優勢。

與基于硅膠的技術不同，Norgen的專有碳化硅核酸純化技術被優化為從不同類型的液體活檢中捕獲極低量的游離核酸，而不會對游離核酸的序列大小表現出任何偏向性。

利用我們先進的生物信息學分析工具和能力，特別是在Illumina平臺上的測序領域，Norgen已經處理了來自頂級研究機構的非常具有挑戰性的樣本。

液體活檢，作為癌癥檢測的樣本類型

01、非侵入性樣本采集

02、適用于檢測所有癌癥類型

03、提供全面的異質性疾病分析

04、提供分子驅動因素的見解

05、允許動態的疾病監測,以監控發展中的腫瘤異質性

1、血清/血漿樣本收集&保存

    CF-DNA/CF - RNA PRESERVATIVE TUBES

    cf-DNA/cf-RNA 保存管 (CAT. 63950, D x 639 50)

• CE-IVD 標志符合歐盟指令 98/79/EC 

• 非常適合用于IVD體外診斷工作流程 

• 在單管中同時保存cf-DNA和cf-RNA

• 不含固定劑的防腐劑，無DNA交聯 

• 在室溫下保存cf-DNA/ct-DNA，30天；37°C下亦可保存8天 

• 在室溫下保存cf-RNA ，30天 

• 在室溫下將循環腫瘤細胞 （CTC） 保存 14 天 

• 運輸/運輸后無血漿容量損失 

• 防止溶血，從而更好地分離血漿

• 防止血細胞凋亡和基因組DNA片段化 

• 生產高質量/數量的血漿cf-DNA/ct-DNA/cf-RNA 

• 用真空方式在10 mL的試管中抽取8.4 mL的血液

無細胞的循環DNA和RNA采集與保存 （全血樣本）

Figure 1. 環境溫度存儲對cf-DNA（pDNA）的影響，以短Alu（115bp）片 段為例，以及對基因組DNA（gDNA）的影響，以大Alu（247 bp）片段 為例。

將血樣分別放入：1）EDTA管，2）競爭者管或 3）Norgen的cf-DNA / cf-RNA保存管中，并在室溫下儲存。在穩定期間，代表pDNA的ALU基因（115 bp）和代表gDNA的ALU基因（247 bp）的水平應保持不變，表 明適當穩定和無溶血。在EDTA管中收集并在室溫下存儲的血漿中未觀察到 cf-DNA的穩定和廣泛的溶血。競爭者顯示在14天后沒有顯著的穩定性，而 Norgen的cf-DNA / cf-RNA保存管中的cf-DNA在室溫下穩定30天。

產品信息：

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tubes		用于體外診斷用途 CE-IVD 標志 符合歐盟指令 98/79/EC
50 Tubes	Cat. Dx63950
50 Tubes	Cat. 63950

a. cf-RNA 提取純化

PLASMA / SERUM CFC-RNA ADVANCED PURIFICATION KIT 

血漿/ 血清 cf-RNA 高級純化試劑盒(CAT. 68200)

• 可靠的血漿/血清輸入范圍從1 ml到6 ml 

• 無苯酚提取 

• 無載體RNA 

• 無偏見地結合和洗脫所有RNA，無論大小或GC含量 

• 將循環RNA和外泌體RNA濃縮到25 uL至50 uL，靈活控制洗脫體 

• 積僅需45min，即得高質量的RNA 

• 在Hamilton MicroLab Nimbus上進行全自動純化程序 

• 純化的RNA適用于各種下游應用，包括小RNA測序 

• 純化基于旋轉柱色譜法，使用Norgen的專有樹脂分離基質

分離提取，所有大小的循環和外泌體RNA，包括microRNA

Figure 1. 使用不同的cfc-RNA純化方法從K2EDTA血漿中純化的RNA中 擴增miR-21和miR-16的rt-qPCR。

與使用Q品牌的純化試劑盒（于二氧化硅的技術）純化的RNA中擴增相 同的miRNA目標相比，Norgens專利的SiC技術，不論是手動提取和自動 設備提取都更有優勢。

產品信息：

PLASMA / SERUM CIRCULATING AND EXOSOMAL RNA 

PURIFICATION KITS (SLURRY FORMAT) 

血漿/血清循環和外泌體 RNA純化試劑盒 （漿液形式，適合大體積樣本與DIY）

 (CAT . 42800 , Dx428 00, 51000 , 5 0900, 29500，滿足不同上樣量)

• CE-IVD 標志，符合歐盟委員會法規 （EU） 第 2017/746 號 （Dx42800） 

• 分離所有大小的循環和外泌體RNA，包括microRNA 

• 適用于多種血漿和血清樣本輸入體積（0.25 mL至5 mL） 

• 將循環和外泌體RNA濃縮成較小的洗脫體積 

• 分離循環和外泌體RNA，不含抑制劑 

• 無偏見地結合和洗脫所有大小或GC含量的RNA 

• 提供旋轉柱或96孔板格式 

• 使用真空或離心法處理96孔板 

• 純化的RNA適用于多種下游應用，包括小RNA測序

• 與Streck無細胞RNA BCT管兼容 

• 純化基于使用Norgen專有樹脂分離基質的旋轉柱層析法

從血漿/血清樣品中快速簡單地分離循環RNA，包括外泌體RNA

Figure 1. 分離和檢測不同血漿容積的循環RNA。

使用Norgen的血漿/血清循環RNA純化和外泌體RNA分離小試劑盒（漿 料格式）從0.5 mL、1 mL和2 mL血漿中分離循環RNA。然后，將純化后 的RNA的3 ?L用作RT-qPCR反應的模板，以檢測人類5S基因。 

從所有使用的血漿樣品體積中檢測到5S基因。 5S rRNA的擴增顯示隨著 樣品輸入量的增加，RNA的數量也增加。這通過隨著樣品輸入量的增加 而降低Ct值來表示。從0.5 mL血漿中分離的RNA用紅線表示，從1 mL血 漿中分離的RNA用綠線表示，而從2 mL血漿中分離的RNA用藍線表示。 黑線對應于無模板對照。

Plasma/Serum Circulating and Exosomal  RNA Purification Kits (Slurry Format)
50 Preps (Mini)	Cat. 51000
50 Preps	Cat. 42800
50 Preps	Cat. Dx42800
25 Preps(Maxi)	Cat. 50900
1 x 96-Well Plate	Cat. 29500

cf-RNA 提取純化

PLASMA /SERUM RNA PURIFICATION KITS 

血漿/血清 RNA 純化試劑盒 (CAT. 55000, 56100, 56200)

• 分離所有大小的循環和外泌體RNA，包括microRNA 

• 適用于多種血漿和血清樣本輸入體積：50 ul to 200 ul 

• 無酚提取 

• 無載體RNA 

• 無偏見地結合和洗脫所有大小或GC含量的RNA 

• 將循環和外泌體RNA濃縮成較小的洗脫體積：10 ?L to 100 ?L 

• 在15-20分鐘內純化高質量的RNA 

• 純化后的RNA適用于各種下游應用，包括小RNA測序 

• 與Streck無細胞RNA BCT?管兼容 

• 純化基于Norgen專有的樹脂分離基質的旋轉柱層析法

從血漿/血清樣品中快速簡單地純化循環RNA和外泌體RNA

Figure 1. 在檢測人類5S轉錄本和miR-21時，確定血漿RNA樣品中存在的 抑制量。

使用Norgen的Plasma/Serum RNA純化最大試劑盒（Cat. 56200）從 1.5 mL、3 mL和5 mL血漿中提取DNA。將洗脫物的增加體積（2、4和8 ?L）用于20 ?L逆轉錄反應，然后進行qPCR擴增反應，觀察Ct值的降低 情況。模板數量增加時Ct值的增加將清楚地表明樣品中存在PCR抑制 劑。

在逆轉錄反應中使用的PCR輸入體積的增加不會影響qPCR擴增得到的 Ct值，無論是對于（A）5S rRNA轉錄本還是（B）miR-21。實際上，Ct 值隨著PCR輸入體積的增加而減小，這表明使用Norgen的試劑盒從血 漿中純化的RNA不含常見的抑制劑。

產品信息：

PLASMA/SERUM EXOSOME PURIFICATION AND RNA ISOLATION KITS 

血漿/ 血清外泌體純化及RNA提取試劑盒 (CA T. 58300, 58500, 58600)

• 完整血漿/血清外泌體的純化和富集，用于功能研究 

• 無論大小或GC含量，都能分離所有大小的RNA，包括microRNA， 沒有偏見 

• 滿足多種樣本輸入體積需求 

• 無酚提取 

• 無需蛋白酶K處理或載體RNA 

• 無需耗時的超速離心、過濾或特殊注射器 

• 無需沉淀試劑或過夜孵育，適用于任何物種的血漿/血清 

• 純外泌體經過純化，不含任何其他RNA結合蛋白 

• 純化基于Norgen專有的樹脂分離基質的旋轉柱層析

從血漿和血清樣本中純化外泌體，并提取外泌體中RNA

Figure 1. 從不同的血漿中純化外泌體，并提取外泌體中RNA。

Norgen的血漿/血清外泌體純化和RNA分離迷你試劑盒（Cat# 58300）被用來從不同血漿體積的外泌體中分離出RNA，使用同 一試劑盒。然后用2 uL分離的RNA作為RT-qPCR反應的模板，評估分離的血漿外泌體miR-26a的擴增情況。(A）血漿外泌體 miR-26a隨著樣品輸入量的增加呈線性下降。(B）血漿外泌體 miR-26a的相對量顯示出良好的線性，回收率超過90%。

產品信息

b.cf-DNA 提取純化

PLASMA/SERUM CFC- DNA ADVANCED PURIFICATION KIT

血漿/血清 CFC-DNA高級純化試劑盒(CAT. 68000 )

• 可靈活處理0.5 mL至6 mL的血漿和血清輸入量 

• 將cfc-DNA和ct-DNA濃縮至可變洗脫體積（25 ?L至50 ?L） 

• 在純化的cfc-DNA中最小化gDNA污染 

• 提取的細胞外循環DNA，無抑制劑殘留 

• 僅需45min，即可提取優質的DNA 

• 適用于從Norgen的cf-DNA/cf-RNA保護管（Cat. 63950，Dx63950）、 Cell-Free DNA BCT?（Streck）、肝素、EDTA或檸檬酸采集的新鮮、保存或冷凍血清/血漿 

• 在Hamilton自動化平臺上進行完全自動化的分離過程 

• 純化基于使用Norgen專有樹脂分離的旋轉柱色譜法

從血漿和血清樣品中快速簡單地純化各種大小的 CFC-DNA 和 CT-DNA

Figure 1. Norgens 血漿/血清 cfc-DNA 高級純化試劑盒用于從 1 mL、2 mL、4 mL 和 6 mL 血漿中純化循環 DNA，這些血漿由 EDTA 上收集的血液作為抗凝劑制備而成。 

然后將2 uL純化的DNA用作qPCR反應的模板，通過靶向代表單核小體 CFC-DNA群體的短ALU基因靶標（115 bp）來評估純化的cfc-DNA的 線性。Norgen的血漿/血清cfc-DNA高級純化試劑盒在所有血漿體積之 間顯示出出色的線性，線性百分比超過90%，表明從所有使用的血漿 體積中高效回收cfc-DNA。

產品信息：

PLASMA /SERUM CIRCULATING DNA PURIF I C A TION KITS ( SLURRY FORMAT)

血漿/血清循環DNA純化試劑盒（漿液形式，適合大體積樣本與DIY） (CA T. 5060 0, 5 1200, 513 00)

• 從血漿和血清樣本中分離所有大小的循環DNA 

• 可提取病毒和細菌DNA 

• 適用于多種血漿和血清輸入體積（50 ?L - 10 mL） 

• 將循環DNA濃縮到小的洗脫體積 

• 根據下游應用選擇不同的洗脫策略 

• 分離無抑制劑的循環DNA，適用于包括PCR、qPCR、甲基化敏感PCR在內的任何應用 

• 與Streck無細胞DNA BCT?管兼容 

• 可從牛奶中高質量和高數量地分離DNA 

• 純化基于旋轉柱層析，使用Norgen的專有樹脂分離基質

從血漿/血清樣品中快速簡單地分離循環DNA

Figure 1. 從0.5 mL和2 mL血漿中檢測人類5S基因。

將Norgen的血漿/血清循環DNA純化Midi試劑盒（漿料格式）與Q 品牌試劑盒進行比較，以評估其分離高質量血漿DNA的能力，以供 敏感的下游應用，如qPCR。當處理0.5 mL和2 mL血漿時，Norgen 樣品（藍色）的擴增速度比競爭對手Q的樣品（紅色）更快，表明 Norgen樣品中存在更多高質量循環DNA的回收率更高。

產品信息:

cf-DNA 提取純化

PLASMA/SERUM CELL-FREE CIRCULATING DNA PURIFICATION KITS 

血漿/ 血清無細胞循環DNA純化試劑盒 (CAT. 55500, D x 55500, 55100, D x 55100, 55600, D x 55600, 55800, D x 55800)

• 可分離病毒和細菌DNA 

• 滿足不同血漿和血清輸入體積（10 uL - 10 ml） 

• 將循環 DNA 濃縮至可變洗脫體積（25 uL - 50 uL） 

• 分離的無細胞循環DNA，不含抑制劑 

• 15-20分鐘內純化高質量的DNA 

• 與Streck Cell-Free DNA BCT? 管兼容 

• 純化基于使用Norgen專有樹脂分離基質的離心柱色譜

從血漿和血清樣品中快速簡單地純化各種大小的循環DNA

Figure 1. 從采用檸檬酸鹽作為抗凝劑采集的50 uL、100 uL和200 uL血漿中純化游離DNA，并與Q公司的試劑盒進行比較。

取2 uL純化的DNA作為模板，在qPCR反應中評估純化的常規5S rRNA基因的相對數量。隨著樣品輸入量的增加，5S rRNA基因的相 對數量呈線性增加。與其他分離方法相比，Norgen的試劑盒顯示出 對常規5S rRNA基因的最一致和最高的回收率。

產品信息：

Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Purification Kits
50 Preps (Micro)	Cat. 55500
50 Preps (Micro)	Cat. Dx55500
50 Preps (Mini)	Cat. 55100
50 Preps (Mini)	Cat. Dx55100
20 Preps (Midi)	Cat. 55600
20 Preps (Midi)	Cat. Dx55600
10 Preps (Maxi)	Cat. 55800
10 Preps (Maxi)	Cat. Dx55800

2、cf-DNA/cf-RNA 研究的實驗室指南

介紹 

無細胞研究提供了一種簡單、全面且非侵入性的診斷和研究方法。通過采集一個快速的血液樣本，研究人員可以診斷 癌癥，揭示未出生嬰兒的特征，或者識別患者的許多遺傳異常。傳統方法如活檢是痛苦且侵入性的，并且很有可能對 患者進行錯誤診斷或造成更大的傷害。為了幫助您在cf-DNA / cf-RNA研究中獲得最大收益，本電子書提供了實驗臺指 南，以確保準確的結果。從使用我們的cf-DNA / cf-RNA保存管進行采集和運輸到核酸的純化，甚至包括測量和測序等 下游應用，Norgen為您的工作流程的每一步提供全面的解決方案。

樣本采集和保存 

由于血漿樣本中cf-DNA和cf-RNA（統稱為無細胞核酸或cf-NA）的濃度較低（1-100 pg/μL），建議首先確定所需的血 液體積。為了收集樣本，最好使用無需依賴EDTA或肝素的血液收集管（BCT），因為這兩種管子都無法在超過18小時 的時間內保持樣本，并且可能會干擾下游應用。此外，如果以室溫（RT）運輸，在EDTA或肝素管中收集的血液將開始 溶血，從而不適合進行cf-NA研究。如果沒有保護管，應在收集后不超過1小時離心回收血漿，并在發貨前將其儲存 在-70°C的干冰上。如果使用了cf保存管，則不需要考慮這一點。

根據所使用的保護管，血樣可以在RT條件下儲存7天至30 天，而不會出現有害水平的溶血。對于EDTA或肝素管來 說，即使儲存不到一天，都會開始出現溶血。圖1顯示了在 Norgen的cf-DNA / cf-RNA保藏管中收集的血液中溶血的水 平與EDTA和另一種商業可得到的血液收集管的比較。與 EDTA相比，Norgen管在30天內保持的血漿中血紅蛋白（溶血的指標）水平較低，EDTA在幾天收集后開始顯示明顯的 溶血。排名第二的競爭對手在14天后開始顯示溶血。

Figure 1. Norgen的cf-DNA/cf-RNA防腐管、競爭對手的試管和 EDTA單管之間的血紅素吸收率比較。血紅素是血細胞裂解的一個很好的指標，因為它在細胞死亡時被釋放出來，并具有獨特的吸光度曲線。

樣本定量和質量確定 

NanoDrop? 儀器不適用于評估血漿中cf-DNA和cf-RNA的質量和數量，因為其檢測閾值為5 ng/μL，比血漿中cf-NA濃 度高出50到5000倍。使用Bioanalyzer確定的RNA完整性數值（RIN）也被排除作為質量確定的手段，因為它依賴于細 胞RNA，具體是18S和28S rRNA。如果樣本經過適當的處理和準備，這兩個標記物都不應存在。如果存在這些標記 物，則樣本已被污染，很可能是與溶血產物有關，因此可能對cf-NA測試無效。

幸運的是，針對低核酸含量和cf-NA特異性提取和定量，存在適用的試劑盒和方法。Norgen提供低豐度DNA和RNA定 量試劑盒，靈敏度可達到1 pg/μL范圍，甚至更低。下面的圖2顯示了不同已知DNA數量的qPCR圖表，證明了這一點。 只需在適當熒光核酸染料的輔助下，這些試劑盒可以與任何qPCR系統一起使用。

可使用改良的Quant-iTTM RiboGreen? RNA檢測試劑盒來定量cfRNA，而類似地改良的Quant-iTTM PicoGreen? dsDNA試劑盒可 定量cf-DNA。請參閱附錄以了解協議的修改內容。 Agilent生產的高靈敏度DNA試劑盒可以檢測低至5 pg/μL的DNA， 而他們的RNA 6000 Pico Kit 結合Bioanalyzer（圖3）使用時，可以 檢測到50 pg/μL的RNA。 Bioanalyzer示蹤圖還可以提供視覺定性 信息。純樣品只會在140-180 bp附近有一個峰，而含有gDNA污染 的樣品則在較高bp范圍內有第二個寬峰，如圖4所示。

Figure 2. 使用Norgen的低豐度DNA定量試劑盒生成的代表性qPCR基線圖。擴增可觀察到500 fg范圍。

Figure 3. Bioanalyzer示蹤圖顯示cf-RNA的高捕獲率（約18個熒光單 位）（A，Norgen血漿/血清cfc-RNA高級純化試劑盒），以及cfRNA捕獲率較低的RNA示蹤圖（約4個熒光單位）（B，競爭對手Q 循環核酸檢測試劑盒）。

Figure 4. Bioanalyzer示蹤圖顯示從Norgen的cf-DNA/cf-RNA保管管 中獲得的純cf-DNA（藍色），經Norgen cf-DNA分離試劑盒純化，以 及從商用血液采集管中獲得的含有gDNA污染的示蹤圖（紅色）。污 染示蹤圖中cf-DNA的增加是由于細胞溶解時釋放的核小體。由于它們 相對穩定，它們是最常見的降解DNA形式之一。

樣品的純度也可以通過觀察Ct值/PCR輸入圖表的線性來確定 （圖5）。隨著PCR輸入的增加，可能干擾反應的化合物濃度也 會增加。Ct值和PCR輸入之間的強烈負相關，且無或最小偏離線 性，表明PCR抑制劑的濃度較低。抑制劑可能由于溶血而進入樣 品，這如前所述可能使樣品失效。

Figure 5. 高純度核酸樣品的代表性Ct值/PCR輸入圖

附錄 

 對于cf-NA定量，建議修改Quant-iTTM RiboGreen? RNA檢測試劑盒和Quant-iTTM PicoGreen? dsDNA檢測試劑盒的方 法是將反應縮放至20 μL，并在0.5 mL光學透明管中進行。其次，不要使用推薦的濃縮DMSO庫存的200倍稀釋（在TE 中），而是改為1000倍稀釋。提供的NA標準應按以下說明準備：

 1) 對于濃度范圍從1 ng/μL到100 pg/μL：

將提供的100 μg/mL RNA標準的2 μL稀釋至最終體積為100 μL，用無核酸酶水稀 釋至最終濃度為2 μg/mL。這將用于準備標準。

2) 對于50 pg/μL到5 pg/μL的濃度：

將2 μg/mL溶液的5 μL與95 μL核酸酶自由水稀釋，獲得最終RNA濃度為100 ng/mL，然后準備以下標準溶液。當然，這也適 用于DNA標準。反應混合物由1μL樣品、9 μL 1X TE和10μL RiboGreen?或PicoGreen?試劑組成。

3、血漿Small RNA-seq工作流程：

1、收集與保存 

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tube，cf-DNA/c f-RNA 保存管 (Cat. Dx69350, 69350) 

• 在室溫下保存 cf-RNA、cf-DNA 和 ct-DNA 長達30天 

• 防止運輸過程中的溶血 

• 血漿回收率高 

• 不含固定劑的防腐劑，無DNA交聯 

• 與市售的cf-RNA和cf-DNA純化方法兼容 

• 提供帶有CE-IVD認證的產品版本

2 、RNA 提取純化

Plasma/Serum RNA Puri?cation Kit ，血漿/血清 RNA 純化試劑盒 (Cat. 55000, 56100, 56200) 

• 利用Norgen專有的樹脂基質來純化RNA 

• 分離所有與蛋白質結合的循環cf-RNA，包括細胞外囊泡的RNA 

• 結合并洗脫所有的RNA，無論其大小或GC含量如何，都不會有偏差 

• 不使用載體RNA 

• 不使用苯酚或氯仿等危險化學品 

• 可處理50 uL至5 mL的血漿 

• 純化的RNA與下游應用兼容，如qPCR、NGS、微陣列等。

Plasma/Serum Exosome Puri?cation and RNA Isolation Kit 

 血漿/ 血清外泌體純化及 RNA 提取試劑盒 (Cat. 58300, 58500, 58600)

• 利用Norgen的專利樹脂基質，先純化外泌體，再純化RNA。 

• 結合并洗脫所有的RNA，無論其大小或GC含量如何，都不會有偏差 

• 不使用載體RNA 

• 不使用苯酚或氯仿等危險化學品 

• 可處理50 μL至10 mL的血漿 

• 純化的RNA與下游應用兼容，如qPCR、NGS、微陣列等。

3 . NGS服務 (SMALL RNA 測序) 

Library Preparation: Small RNA Library Prep Kit 

文庫制備： 小RNA文庫制備試劑盒 (Cat. 63600) 

• 針對超低輸入的RNA進行了優化，尤其是來自體液的RNA 

• 多達48個indices 的可用性 

• 快速和簡單的工作流程 

測序 

• Illumina 平臺 

生物信息分析 

• 使用生物信息學分析了解轉錄后調控機制 

• 研究基因差異表達并發現新的生物標志物 

• 完整的報告和隨時可發表的圖文數據

4、無創產前檢測NIPT，開放平臺工作流程

1. 收集與保存 

cf-DNA/cf-RNA Preservative Tube，cf-DNA/c f-RNA 保存管 (Cat. Dx69350, 69350)

• 在室溫下保存 cf-RNA、cf-DNA 和 ct-DNA 長達 30 天 

• 防止運輸過程中的溶血 

• 血漿回收率高 

• 不含固定劑的防腐劑，無DNA交聯 

• 與市售的cf-RNA和cf-DNA純化方法兼容 

• 提供帶有CE-IVD認證的產品版本

References 

a. Ward Gahlawat A, Lenhardt J, Witte T, et al. Evaluation of storage tubes for combined analysis of circulating nucleic acids in liquid biopsies. International Journal of Molecular Sciences. 2019;20(3):704. doi:10.3390/ijms20030704 

b. Maass KK, Schad PS, Finster AM, et al. From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube. Cancers. 2021;13(12):3002. doi:10.3390/cancers13123002

2 . DNA提取純化 

Plasma/Serum Cell-Free Circulating DNA Puri?cation Kits 血漿/血清無細胞循環DNA純化試劑盒(Cat. 55500, 55100, 55600 and 55900) 

• 利用Norgen公司專有的樹脂基質純化細胞外循環DNA 

• 分離所有蛋白結合的循環cf-DNA 

• 無論大小或GC含量如何，都能捕獲和洗脫所有DNA，沒有偏差 

• 不使用苯酚或氯仿等危險化學品 

• 可以處理10μL到10 mL的血漿 

• 將DNA洗脫到25-50 μL的洗脫體積 

• 純化的DNA與qPCR、NGS等下游應用兼容

3 、文庫制備 

Norgen不提供DNA的文庫制 備試劑盒，但是，我們的RNA純化和DNA分離試劑盒與任何用于全基 因組測序的商業文庫制備試劑盒兼容

4 .測序和數據分析 

有了準備好的DNA，可以進行全 基因組測序來觀察整個胎兒基因組，以確定是否有任何遺傳異常。 其他有針對性的方法包括SNP分析和微陣列

5、客戶成功案例： 

Alex Rolland: 使用外泌體 ct-DNA 改善癌癥診斷

我的名字是Alex Rolland，我是Cancer Treatment Options and Management Inc.（CTOAM）和Liquid Biopsy Labs的聯合創始人和首 席科學家。 

在我們尋找從血液中提取ct-DNA的試劑盒時，我是第一次聽說Norgen Biotek，時間大概在2018年末/2019年初。我們當時測試了非常多的試劑 盒并查看了評論，但都未能獲得足夠的ct-DNA量，無法在TaqmanddPCR平臺上獲得結果。Norgen的試劑盒基于離心技術，易于提取，并 且初始微型試劑盒使我們能夠獲得珍貴的可測試的ct-DNA，因此我被 Norgen強烈吸引！ 

 Norgen是唯一給我們帶來期望結果的公司。此外，我們一直在使用一種來自大公司的ct-DNA保存管，它允許我們從兩 個管中獲得2-4 mL的血漿/血清。然而，這些管子存在問題，Norgen的一位高級研究科學家建議我嘗試Norgen的管 子。再次，結果令人驚訝，我們能夠從2個管子中獲得多達7-10 mL的血漿/血清。這顯著提高了我們的產量，并使我們 能夠進行下一階段的推進。

總結一下我們在Norgen產品中發現的優勢: 

• 從血管獲得高產量的血漿/血清 

• 從他們的提取試劑盒中獲得高產量的癌癥/胚 泡相關的ct-DNA

Alex Rolland 在研究中使用的Norgen產品

案例研究

案例1

 一名結腸癌患者在其腫瘤DNA測序中發現了PRKDC（腫瘤抑 制基因）的一個未定變異體（VUS）。我們進行了一個基于 計算機的分析/序列保守性分析，結果顯示這個變異體很可 能是致病的。事實證明，我們隨后使用它來檢測此患者的早 期復發情況，并評估治療效果。

Figure 1. 從患者全血中獲取的PRKDC A358T外泌體DNA量。誤差線表示95%置信區間（CI）

案例2 

該患者患有晚期乳腺癌，我們的測序結果顯示其PIK3CA基 因發生了突變。當時，用于治療特定類型乳腺癌的藥物 Alpelisib在加拿大尚未獲得批準，因此我們聯系了藥品制造 商并說服他們提供免費的藥物，同時從加拿大衛生部獲得 了同情使用權，并使用ct-DNA監測患者的治療反應。不幸 的是，在這種情況下，患者只能短暫地耐受藥物，并不得 不停止使用。正如您所看到的，我們的測試顯示了未經有 益治療的ct-DNA增加。

Figure 2. 從患者全血中獲取的PIK3CA P1047L外泌體DNA量。誤差線表示95%置信區間（CI）

真實的科學家，真實的故事，真實的成功！

一、尿液收集&保存

URINE COLLECTION AND PRESERVATION TUBES 

尿液收集與保存管 (CAT . 18116 , 18120, 18111, 18129)

• RNA/microRNA/DNA/蛋白質，可以在室溫下保存超過2年 

• 與大多數DNA、總RNA、microRNA和蛋白質分離方法兼容 

• 保存劑以單劑量液態格式（安瓿）提供 

• 保存劑也以干燥格式在管中提供 - 尿液收集和保存管 

• 尿液收集和保存管有4種方便的尺寸：5 cc管、15 cc管、50 cc管和 120 cc杯

簡單且快速地保存尿液樣本

Figure 1. Norgen的尿液保存劑中RNA的穩定性

從多個健康捐贈者收集尿液樣本并混合，然后將尿液分裝到 Norgen的尿液收集和保存管（5cc）（Cat.18116）中，保存在-20° C、4°C和室溫下長達24個月。然后使用Norgen的尿液總RNA純化 Maxi Kit（漿料格式）（Cat.29600）從保存的尿液中在時間0、1個 月、2個月、4個月、8個月、12個月、16個月和24個月后隨后分離 尿液RNA。

產品信息：

a. cf-RNA 提取純化

URINE CELL-FREE CIRCULATING RNA PURIFICATION KITS 

尿液無細胞循環RNA純化試劑盒(CAT. 56900, 57000, 57100)

• 250 μL 至 30 mL ，滿足多種尿液上樣量 

• 無苯酚萃取 

• 無載體RNA 

• 結合并洗脫所有RNA，無論大小或GC含量如何，無偏差 

• 將循環 RNA 和外泌體 RNA 濃縮成 50 μL 至 100 μL 的靈活洗脫體積 

• 25 - 30 min 提取純化高質量 RNA 

• 純化的RNA適用于各種下游應用，包括Small RNA測序 

• 純化基于使用Norgen專有樹脂分離基質的離心柱色譜

分離所有大小的循環和外泌體RNA，包括microRNA

Figure 1. 從不同尿液體積中純化無細胞循環RNA和外泌體RNA。 

使用Norgen的尿液無細胞循環RNA純化小試劑盒（目錄號56900） 從0.5 mL、1 mL和2 mL尿液樣本中純化無細胞循環和外泌體RNA。 然后，將純化的RNA中取2微升作為RT-qPCR反應的模板，以評估 （A）常規的5S rRNA轉錄本和（B）miR-21的擴增情況。無論是 （A）5S rRNA轉錄本還是（B）miR-21的平均Ct值都隨著樣本輸入 量的增加而線性減少。

產品信息：

URINE EXOSOME PURIFICATION AND RNA I SOL ATION KITS 

尿液外泌體純化和RNA分離試劑盒 (CAT. 58400, 58700, 58800)

a. 無論大小或GC含量，都可以結合和洗脫所有RNA，沒有偏差 

b. 分離各種大小的外泌體RNA，包括microRNA 

c. 可變的尿液輸入量（250 ?L至30 mL） 

d. 不需要苯酚萃取，蛋白酶K處理或載體RNA 

e. 不需要耗時的超速離心，過濾或特殊注射器 

f. 不需要沉淀試劑或過夜孵育 

g. 與任何物種的尿液兼容 

h. 純外泌體被純化并且不含任何其他RNA結合蛋白

i. 純化基于使用Norgen專有樹脂分離基質的旋轉柱層析

完整尿液外泌體的純化和富集，滿足功能研究需求

Figure 1. 從不同尿量中純化的外泌體中分離RNA。 

使用Norgen的尿液外泌體純化和RNA分離試劑盒（Cat. 58800）使用相同的試劑盒從不同尿量中純化外泌體，并分 離RNA。隨后，使用分離的RNA的2微升作為RT-qPCR反應 中的模板，評估分離的尿外泌體miR-30a的擴增情況。（A） 隨著樣品輸入量的增加，尿外泌體miR-30a呈線性下降趨 勢。B）尿外泌體miR-30a的相對量顯示出良好的線性關系， 回收率超過90％。

產品信息：

b. cf-DNA 提取純化

URINE CELL-FREE CIRCULATING DNA PURIFICATION KITS 

 尿液無細胞循環DNA純化試劑盒(CAT. 56600, 56700, 56800)

分離病毒DNA 

適用于不同體積的尿液輸入（250 ?L - 30 mL） 

將循環DNA濃縮到靈活的洗脫體積范圍內（50 ?L - 100 ?L） 

分離的細胞外循環DNA，無抑制劑 15-20min，即得高質量DNA 

與Norgen的尿液保存劑和其他市售尿液保存劑兼容 

純化基于使用Norgen專有的樹脂分離基質的旋轉柱色譜法。

從新鮮、保存或冷凍的尿液樣本，分離出所有大小的循環DNA

Figure 1. 在檢測人類5S基因時，確定尿液細胞游離DNA樣本中的抑 制量。

使用Norgen的尿液細胞游離DNA純化Maxi試劑盒（型號56800）， 從10 mL、20 mL和30 mL尿液中分離DNA。在20 ?L的qPCR反應中 使用不同體積的洗脫物（2、4和8 ?L），觀察Ct值是否有減小。隨 著模板量的增加，Ct值的增加將明確表明樣本中存在PCR抑制劑。 在qPCR中使用不同洗脫物體積作為模板并不影響由qPCR生成的Ct 值。事實上，Ct值傾向于隨著PCR輸入體積的增加而減小，表明使 用Norgen試劑盒純化的尿液中的DNA不含通常存在于尿液中的常見 抑制劑。

2、尿液 Small RNA- Seq 工作流程

1、 收集與保存 

Urine Collection and Preservation Devices - 5cc, 15cc, 50cc, 120cc, single dose， 

• 尿液收集與保存管 (Cat. 18118, 18122, 18113, 18126, 18129) 

• 提供多種尺寸的用戶友好型尿液收集裝置 

• RNA/microRNA/DNA/蛋白質可以在室溫下保存超過2年 

• 兼容商業化的cf-RNA純化方法 

• 在運輸尿液時，可以在常溫下保存游離大分子、剝落細胞和微生物

2、RNA提取純化 

Urine Cell-Free Circulating RNA Puri?cation Kit，

尿液無細胞循環RNA純化試劑盒 (Cat. 56900, 57000, 57100) 

• 利用Norgen的專有樹脂基質純化細胞外循環RNA 

• 分離所有蛋白結合的循環cf-RNA，包括細胞外囊泡的RNA 

• 無論大小或GC含量，都能結合和洗脫所有RNA，沒有偏見 

• 不使用載體RNA 

• 不使用危險化學品，如苯酚或氯仿 

• 可以處理250 ?L到30 mL的尿液 

• 純化的RNA與下游應用（如qPCR、NGS、微陣列等）兼容。

Urine Exosome Puri?cation and RNA Isolation Kit， 

尿液外泌體純化和RNA分離試劑盒 (Cat. 58400, 58700, 58800)

3 . NGS服務 (SMALL RNA 測序) Library Preparation: Small RNA Library Prep Kit 

文庫制備： 小RNA文庫制備試劑盒 (Cat. 63600) 

• 針對超低輸入的RNA進行了優化，尤其是來自體液的RNA 

• 多達48個indices 的可用性 

• 快速和簡單的工作流程

測序 

• Illumina 平臺

生物信息分析

• 通過生物信息學分析來理解轉錄后調控 

• 檢查差異表達并發現新的生物標志物 

• 完整的報告和隨時可發表的圖文數據

三、文章 / PUBLICATIONS

1. From Sampling To Sequencing: A Liquid Biopsy Pre-Analytic Workflow To Maximize Multi-Layer Genomic Information From A Single Tube https://www.mdpi.com/2072- 6694/13/12/3002 

2 . Evaluation of Storage Tubes for Combined Analysis of Circulating Nucleic Acids in Liquid Biopsies https://www. mdpi.com/1422-0067/20/3/704 

3 . Comprehensive evaluation of methods to isolate, quantify, and characterize circulating cell-free DNA from small volumes of plasma https://link.springer.com/article/10.1007/s00216-015-8846-4 

4 . Effect of microRNA GC Content on RNA Purification Efficiency (App Note made by Norgen) https://norgenbiotek. com/sites/default/files/resources/plasma_serum_circulating_ and_exosomal_rna_purification_kit_slurry_format_effect_of_ microrna_gc_content_on_rna_purification_efficiency_application_notes_465_0.pdf 

5 . Comparison of Four Commercial Kits for Isolation of Urinary Cell-Free DNA and Sample Storage Conditions https:// www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7236016/ 6 . Measurement Biases Distort Cell-Free DNA Fragmentation Profiles and Define the Sensitivity of Metagenomic Cell-Free DNA Sequencing Assays https://academic.oup.com/clinchem/ article/68/1/163/6410769?login=false