癌癥檢測技術大牛Alex Rolland訪談

當借助醫學檢測來檢查我們的健康狀況時，我們可能得不到一個準確的答案。 

醫學檢測中所用的各種指標很難說清楚我們當時到底是健康還是不健康。   

幸運的是，世界各地的科研人員正努力為癌癥患者的健康狀況提供更準確的答案。  

癌癥基因檢測技術大牛 Alex Rolland （Cancer Treatment Options and Management Inc. 和 Liquid Biopsy Labs 的聯合創始人兼首席科學家） 和他的團隊專攻解答腫瘤治療的檢測技術問題。例如：這種癌癥治療的效果如何？病人是否處于緩解期？等等。  

請閱讀下面 Alex Rolland 的成功故事，他們團隊的研究成果為改善癌癥治療方案并為癌癥治療的未來帶來了新希望。   

為什么我選擇 Norgen Biotek 的產品

大家好，我叫 Alex Rolland。 我是 Cancer Treatment Options and Management Inc. (CTOAM) 和 Liquid Biopsy Labs 的聯合創始人兼首席科學家。    

我在2019年初首次聽說了 Norgen Biotek 。當時我正在為我們的 digital PCR 血液活檢實驗室尋找可靠的試劑盒來提純 ct-DNA (circulating tumor DNA，循環腫瘤 DNA) 。在此之前，我們測試了許多不同品牌的試劑盒，但都沒有成功。原因是用這些試劑盒提純出來的外泌體，無法用我們的Taqman-ddPCR  (Taqman熒光微滴數據聚合酶鏈式反應) 技術檢測出來。

我喜歡 Norgen 的試劑盒，因為他們的試劑盒基于離心技術，易于操作。首先，通過Norgen的微型試劑盒（Micro Kit）我們獲得了少量 ct-DNA，這些 ct-DNA 可以用我們的 Taqman-ddPCR 檢測出來。因此我打電話給Norgen Biotek并與一位高級科學家進行了交談，他告訴我 Norgen 正在研究一種使用兩個不同尺寸色譜柱的新方案，并問我愿不愿意試一試。     

我想試一試。因為Norgen 是唯一一家能給我們帶來預期結果的公司。不僅如此，另一個讓我們一直在使用Norgen試劑盒的原因是：某家大公司的 ct-DNA 保存管只能讓我們從兩個試管中獲得 2-4 mL 的血漿/血清，但是Norgen 的 cf-DNA/cf-RNA 保存管 (Cat. 63950) 讓我們能夠從 2 個試管中獲得多達 7-10 mL 的血漿/血清。結果令人驚嘆！這大大增加了我們可分離血漿/血清的體積，讓我們能夠順利完成接下來的測試。  

我們隨后測試了 Norgen 的血漿/血清無細胞循環 DNA 純化中型試劑盒 (Cat. 55600) 和血漿/血清外泌體純化和 RNA 分離中型試劑盒 (Cat. 58500), 兩者的測試結果都非常好。簡單來說，這項測試是從攜帶突變癌癥基因的癌癥患者身上采集的血液，使用 Norgen 中型試劑盒監測他們的治療反應。重要的是當我們使用Norgen的試劑盒進行監測時，我們只希望尋找與活躍的腫瘤細胞相關的 ct-DNA (即從外泌體/外泌體附著等釋放的DNA), 并且希望排除來自細胞凋亡或細胞死亡的 DNA。    

我們發現活躍的腫瘤細胞相關的 ct-DNA 主要對應著 146 bp及以下的 DNA 片段，但是超過146 bp的DNA片段通常與垂死的腫瘤/細胞凋亡/細胞裂解有關。Norgen的提取試劑盒專注于 ct-DNA 的小片段DNA，讓我們能夠專注于活躍腫瘤細胞的 ct-DNA，這一點對癌癥檢測來說非常重要。  

總結一下我們所認為 Norgen 產品的優勢：

(1) Norgen的采血管可以提供更多體積的血漿/血清。

(2) Norgen的試劑盒可以提取更高產量的活躍腫瘤細胞的外泌體 ct-DNA。  

我們得到的ct-DNA結果案例：

迄今為止，我們已經創建了 100 多種定制 TaqMan 探針，通過癌基因突變、抑癌基因和意義不明的變異 (即VUS) 中的突變來監測癌癥患者。 

案例一：

在 PRKDC（腫瘤抑制基因）中攜帶 VUS 的 CRC 患者。我們在患者的腫瘤 DNA 測序結果中發現了VUS，通過進行計算機分析和序列保守分析，表明這種特異的VUS很可能是致病的。事實上，我們隨后用該VUS來檢測該患者的早期復發和治療的效果。    

圖 1：從患者全血中獲得的 PRKDC A358T 外泌體 DNA 的量。 誤差線表示 95% 的置信區間 (CI) 

案例二：

該患者患有晚期乳腺癌，我們的測序結果鑒定出了 PIK3CA 突變。 在治療過程中，醫生為患者使用了Alpelisib（一種用于治療特定類型乳腺癌的藥物）。我們通過ct-DNA監測了患者的反應，在使用Alpelisib治療之前，患者全血內的外泌體含量很高 (May 27/20)。通過Alpelisid的治療之后，患者的外泌體量有了極大的減少 (Aug. 05/20)。 不幸的是，案例中的患者只能在短時間內忍受這種藥物，之后不得不停藥。如圖所示，在停藥治療以后 (Sept. 13/20)  ct-DNA立刻增加。這表明患者全血中的外泌體量可以用于監測治療效果。   

圖 2：從患者的全血中獲得 PIK3CA P1047L 外泌體 DNA, 誤差線表示 95% 的置信區間 (CI) 

案例三:

在這個案例中，一名肺癌女性患者被認為在接受免疫治療時病情有所惡化。 患者的醫生告訴她由于腫瘤細胞數量的增加他們將停止她的免疫治療，她別無選擇。然而，如果僅僅通過放射成像的腫瘤檢測技術，大約 30% 的免疫治療患者會出現假性進展，因為腫瘤內免疫細胞的快速增加會導致可見腫瘤的變大和腫瘤細胞數量的增加。這種情況并不能依靠傳統的成像診斷（CT、MRI等）檢測出來。因為即使這些腫瘤是壞死的 (由于免疫細胞的SUV增加), 在 PET-CT 上這些腫瘤細胞的成像信號還是很強。 但是通過使用 ct-DNA 來進行診斷，我們能夠向腫瘤學家證明該患者確實正在經歷假性進展，患者應該繼續接受治療，并繼續從治療中獲益。 在這個案例中，我們可以看出，基于ct-DNA的診斷結論與成像診斷結論相反。    

圖3：從患者全血中獲得的KRAS G12D外泌體DNA的數量，誤差線表示95%的置信區間（CI）   

案例四：

在這個案例中，患者化療效果不錯。但在后續的免疫治療中，ct-DNA顯示出明顯的增加，表明免疫治療沒有效果。這一實時數據使醫生能夠及時調整治療計劃。   

圖4：從患者全血中獲得的KRAS G12D外泌體DNA的數量，誤差線表示95%的置信區間（CI） 

Norgen Biotek 的幫助：從血樣采集，到生物分子提純，到高通量測序

最近，Norgen與我們一起進行基于RNA seq的基因表達研究。通過分離血液的外泌體并且提純外泌體RNA，我們可以獲得高濃度的RNA來進行我們獨特的外泌體RNA癌癥基因表達研究。RNA 基因表達研究發現，我們能夠從緩解期和復發期癌癥患者的腫瘤相關外泌體中獲得2萬個基因的表達信息。令人興奮的是，當我們對沒有癌癥的健康參與者使用這種方法時，我們無法獲得足夠數量的測序讀數！這更加表明了Norgen的外泌體試劑盒是特異性針對于活躍腫瘤細胞的。  

我們的測試結果

通過我們的研究，我們開發了一個只在活躍癌癥細胞中存在的轉錄RNA和基因的檢測面板。為了準確起見，我們在一個大型的正常組織面板上進行了大量投資，并使用完全相同的技術來獲得正常組織的表達譜。通過比較從腫瘤外泌體RNA獲得的RNA表達譜和正常組織譜，我們可以：   

(1) 識別出癌癥確診前的早期癌癥活動。  

(2) 識別癌癥患者處于緩解期還是早期復發時期。   

(3) 識別癌癥患者對治療是否有反應。  

(4) 識別癌癥中 "當前 "驅動基因的全身表達。    

(5) 確定癌癥發展的潛在驅動因素 – 例如，如果一個高表達的基因相對于特定的身體組織過度表達，能讓我們確定靶向藥物的特定組織效益。換句話說，如果基因X在外泌體中相對于正常的肝臟和肺部有過度表達，但相對于正常的骨骼水平卻沒有，那么這種靶向藥物可能對這些器官有益，但對骨骼卻無益。   

(6) 這項測試讓我們能夠確定在腫瘤DNA測序中發現的VUS是否參與了癌癥（基于表達水平）。  

對我們團隊來說病人是最重要的。我們的腫瘤外泌體研究有可能讓那些原本被提供錯誤治療、被迫停止有益治療、或者無法獲得迫切需要的癌癥治療藥物的癌癥患者們獲得正確、有效的治療，延長生存時間，并且提高生活質量。這些檢測工具為我們的工作提供了一個關鍵機制，讓我們能夠給世界各地的癌癥患者帶來福音。   

如果沒有 Norgen，這一切都不可能實現！

癌癥診斷的未來

像 Alex Rolland 和他的團隊這樣的科學家正在為腫瘤學的研究推波助瀾，Norgen Biotek 很榮幸能對此研究過程有所幫助。 通過提供更精確的檢測、更準確的治療，我們希望這項研究能有助于降低癌癥相關死亡率。   

感謝 Alex Rolland 和 CTOAM Inc. 團隊的奉獻精神和辛勤工作。  

了解更多有關Norgen Biotek產品的信息，請點擊下面的鏈接：

• 血漿/血漿無細胞循環DNA純化中提試劑盒（提取試劑盒）

http://www.babyforumlaexchange.com/products/NGB-55600.shtml

• 血漿/血漿無細胞循環RNA純化中提試劑盒（提取試劑盒）

http://www.babyforumlaexchange.com/products/NGB-58500.shtml

• cf-DNA/cf-RNA保存管 （50）

http://www.babyforumlaexchange.com/products/NGB-63950.shtml  

作為Norgen Biotek在中國的獨家代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供最全面的Norgen Biotek產品，更具價格優勢，更高性價比的選擇，和更快的到貨時間。  

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