Assay Genie：脂肪酸攝取試劑盒

脂肪酸（fatty acid，FA）是植物、動物和微生物體內脂質（溶于脂肪的生物體內組分）的重要成分。一般而言，脂肪酸由一條含有偶數個碳原子的直鏈組成，鏈的一端有氫原子，另一端有羧基（-COOH）,正是這個羧基使其成為酸（羧酸）。如果碳與碳之間的鍵都是單鍵，脂肪酸就是飽和的，如果其中任何一個鍵是雙鍵或三鍵，脂肪酸就是不飽和的。在自然界中脂肪酸不以游離狀態存在，通常它們與甘油結合形成甘油三酰的形式存在。脂肪酸是心臟和骨骼肌中用于維持收縮功能的主要燃料來源。為了滿足機體的能量需求，脂肪酸的攝取和β-氧化必須協調調節，以確保線粒體β-氧化有足夠但不過量的供應。  

圖1.位于線粒體外膜上的CPT1和位于線粒體內膜上的CPT2在將長鏈脂肪酸以?；o酶A形式運輸到線粒體基質中的作用示意圖 

脂肪酸攝取

長鏈脂肪酸(LCFA)作為β-氧化的底物是動物重要的燃料來源，是許多不同細胞結構的基石。長鏈未酯化脂肪酸(LCFA)通過膜轉運蛋白(CD36、FABP等)轉運到細胞中，細胞中LCFA水平升高在糖尿病、肥胖相關疾病、心血管疾病和某些形式的癌癥中很常見。因此，脂肪酸攝取是代謝性疾病治療的重要靶點，也是代謝研究的重要課題。Assay Genie的基于細胞的脂肪酸攝取檢測試劑盒（cat#BA0184）利用熒光脂肪酸類似物，該類似物被脂肪酸轉運蛋白攝取并在細胞內積累。加入熒光猝滅試劑以阻斷培養基中細胞外的熒光信號。細胞攝取脂肪酸類似物，通過檢測λex/em = 488/523nm處熒光信號的增加評估細胞中的脂肪酸攝取活性，并進行激活劑和抑制劑的篩選。

圖2. 3T3-L1細胞脂肪酸攝取測定：將3T3-L1細胞以每孔60,000個細胞的密度接種，并進行饑餓處理。左上方：在無胰島素和存在160 nM胰島素以及30 μM競爭劑2-溴棕櫚酸酯的情況下，3T3-L1細胞的分化和未分化活性。右上方：3T3-L1脂肪細胞對胰島素的脂肪酸攝取增加。左下方：2-溴棕櫚酸酯的脂肪酸轉運抑制曲線。抑制劑與工作試劑一起加入，而不是在30分鐘的預孵育期間加入。右下方：槲皮素的脂肪酸轉運抑制曲線。抑制劑在運行前孵育30分鐘。 

脂肪酸氧化

脂肪酸氧化（Fatty Acid Oxidation，FAO）是肉堿棕櫚酰轉移酶 1和2（CPT1和CPT2）將長鏈脂肪酸轉運到線粒體基質后經羥?；o酶a氧化為乙酰輔酶a、NADH和FADH2并生成能量的過程，脂肪酸氧化分為四步： 

1）?；o酶A脫氫酶催化脫氫反應。

2）烯酰輔酶A水合酶催化水合作用，通過雙鍵添加水。 

3）3-羥?；?輔酶A脫氫酶催化脫氫反應，產生NADH。 

4）β-酮硫解酶催化硫酯裂解，裂解末端乙?；o酶A基團并形成新的?；o酶 A，新?；o酶A比原?；o酶A短兩個碳原子。 

脂肪酸β-氧化系統在人類中的重要性通過一組稱為脂肪酸氧化障礙（FAODs）的遺傳疾病得到了體現。FAODs是一類脂肪酸運輸和氧化缺陷的異質性疾病群，以常染色體隱性遺傳方式傳遞，臨床表現范圍廣泛。此外，證據表明，胎兒發育期間對FAO活性的調節不僅對胎兒生命至關重要，而且對成年期的健康和疾病也有影響。因此，FAO活性的測量為許多疾病的病理生理和代謝基礎提供了有價值的見解。Assay Genie的非放射性FAO檢測試劑盒基于底物辛酰輔酶A的氧化反應。產生的NADH與還原反應產生的四唑鹽INT結合形成甲瓚。甲醛產物在492nm處表現出最大吸收，因此甲瓚的吸收強度與增加的FAO活性成正比。

圖3. 脂肪酸氧化檢測:從健康倉鼠心臟和與心力衰竭相關的TO2倉鼠模型心臟制備組織裂解物。裂解物被用于測定，脂肪酸氧化水平被量化。

圖4. 脂肪酸氧化試檢測原理:辛烷酰輔酶a是底物，而不是反應的產物。   

除了脂肪酸攝取和脂肪酸氧化檢測試劑盒，Assay Genie的游離脂肪酸檢測試劑盒提供了一個簡單的，一步和高通量測定游離脂肪酸。在這個實驗中，游離脂肪酸被酶轉化為?；o酶a，隨后轉化為H₂O₂。所得的H₂O₂與特定的染料反應形成粉紅色的產物。570nm處的光密度或熒光強度(530/585 nm)與樣品中游離脂肪酸濃度成正比。

Assay Genie是一家來自愛爾蘭的生物科研試劑供應商，可提供超過180000種產品，產品種類豐富。公司主要有三條產品線：ELISA Genie，Assay Genie，Antibody Genie 。旗下涵蓋了15種種屬的高品質的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測的指標種類豐富，覆蓋免疫、代謝和分子等多種研究領域，是科學研究中便捷的小助手。